高通量测序技术中一个重要环节就是文库构建，随着技术的不断完善，建库方法正朝着低成本、高通量和低起始量的方向发展。在文库构建过程中，试剂盒的选择是非常重要的，要根据不同的样本情况，选择合适的建库试剂盒。今天小编将为大家比较Illumina 的两种常用DNA建库试剂盒—TruSeq和Nextera，看一下这两种建库方法有何异同，为后期小伙伴们建库选择试剂盒提供参考。以下内容全是干货，拿走不谢~

Illumina TruSeq DNA建库方法

TruSeq DNA建库方法采用超声波方法对DNA进行随机打断，然后加接头，片段筛选和PCR扩增。TruSeq DNA建库方法比较常用，对DNA的质量要求较低，自动化程度高，基因组覆盖度高，适合普通基因组的文库构建，缺点是操作步骤较多，耗时较长。图1为TruSeq DNA建库流程图，建库流程如下：

DNA超声打断

末端修复

末端加”A”

接头连接

片段筛选

PCR富集目的片段

图1 TruSeq DNA建库流程图

Illumina Nextera DNA建库方法

Nextera DNA建库方法运用高活性的转座酶，完成DNA的片段化和加接头，具有快速、操作简单和低建库起始量的优点，缺点是插入序列具有偏好性，对DNA的纯度和DNA浓度准确性要求较高。

Nextera建库方法采用转座酶随机插入并将基因组DNA打断成长度大小为300bp左右的片段，同时将测序所需的adaptor直接在插入打断的同时连接到片段的两端，缩短了建库时间、减少了样品的需求量，因此特别适合样品量有限的应用，如肿瘤活检、降解的DNA或纯化的DNA。图2为Nextera DNA建库流程图，建库流程如下：

转座酶片段打断，连接接头

清洗文库DNA片段（去除转座酶）

5个循环PCR加P5、P7接头和index

片段筛选

图2 Nextera DNA建库流程图

划重点

看了上面的内容是不是有点红红火火恍恍惚惚的感觉，没关系，小编为大家划重点啦~TruSeq DNA建库方法对DNA的质量要求较低，成本低，基因组覆盖度高，自动化程度高，适合普通基因组建库；Nextera建库方法操作简单，耗时短，建库起始量低，适合样品量有限的样品建库。有了小编的分享，再也不用为试剂盒的选择发愁啦~有问题的小伙伴们可以给小编留言哦~

参考文献：

[1]Adey A, Morrison H G, Xun X, et al. Rapid, low-input, low-bias construction of shotgun fragment libraries by high-density in vitro transposition[J]. Genome biology, 2010, 11(12): 1.

[2]Lamble S, Batty E, Attar M, et al. Improved workflows for high throughput library preparation using the transposome-based nextera system[J]. BMC biotechnology, 2013, 13(1): 1.